Penyakit trofoblastik dalam ginekologi

Nombor Paten: 1171522

Teks

Kesatuan Republik Sosialis Soviet dari 4 hingga 12, USSR dan Kerajaan Negeri untuk Kes dijelaskan dalam keterangan kesaksian anak-anak. Dan, penyusunan semula lain, indupozon dalam kromosom digunakan untuk peta genetik kolena. - "Genetik", 16.1187-1194, I 01171522; (54) (57) KAEDAH MENGHASILKAN MUTAN POLIAUXOTROPI Uegzdp 1 a 1 pu. Dengan melakukan translokasi transposon dan akalis populasi kepada kehadiran mutasi, yang penting untuk mendapatkan polyauxotrophs dengan diberikan mutasi transduce dengan phage P 1 sc, 1, 1 g 100 g, ke dalam sel penerima, mutasi stabil, yang masing-masing disebabkan oleh transposon yang berlainan dengan pemilihan awal pada medium nutrien yang lengkap.Penemuan ini berkaitan dengan genetik bakteria, iaitu, penghasilan strain dengan beberapa auxotrophy. kaedah 1 dengan penyusunan semula transposon (TP), yang melibatkan pengenalan TP 10 atau TP 9 ke dalam genom mikroorganisma yang dikaji dan pencarian di antara klon yang menerima transposon mutan mono-auxotrophic, pada populasi yang mana pelbagai tambahan pengayaan transposon dikesan oleh analisis langsung atau kaedah pengayaan penisilin Walau bagaimanapun, kaedah ini memungkinkan untuk menerima sekumpulan mutasi auxotrophic secara rawak, dan tidak ditentukan oleh tugas eksperimen yang akan datang, Mutasi tambahan muncul sebagai akibat penyongsangan apabila bahagian kromosom terbalik sebanyak 180, atau penghapusan (kehilangan serpihan DNA dengan panjang yang berbeza), yang secara signifikan mengubah susunan gen dan strukturnya. Oleh itu, strain polyauxotrophic seperti ini tidak biasa dan tidak dapat digunakan dalam kebanyakan percubaan genetik. Lebih-lebih lagi, auxotrophs yang dihasilkan dari inversi tidak stabil dan dengan frekuensi tinggi terbalik kepada jenis asalnya. Kaedah ini memakan masa terutama berkaitan dengan mikrob wabak, kerana memerlukan pengesahan sebilangan besar klon, penggunaan beberapa pengayaan penisilin dan memerlukan banyak masa. polyauxotrophs mikroba wabak dengan mutasi yang diberikan. Ini dicapai oleh fakta bahawa, mengikut kaedah mendapatkan mutans polyeuxotrophic Wegwipp Revg.v dengan melakukan translokasi transposon dan menganalisis populasi untuk kehadiran mutasi, mutasi stabil diubah dengan fage P 1 sc 1 1 g 100 gv ke dalam sel penerima, masing-masing disebabkan oleh transposon yang berlainan dengan pilihan awal untuk pemilihan medium nutrien berkhasiat.Contoh 1 Budaya 7. semakan dengan trapsposon yang dibina di lokus kromosom tertentu, misalnya 5 1 О 15 20 25 30 35 40 45 50 55 ukuran, Y, reag 1.v EG ag 8 Tp 10 ditanam di Kaldu LB hingga kepekatan 10 sel dalam 1 ml. Selepas ini, lysate phage P 1 lysate ditambahkan dengan 1 g 100 gv yang disebabkan oleh strain dengan auksotrofi yang dikehendaki yang dimediasi oleh transposon lain, contohnya, telur 5. Banyaknya jangkitan harus sama dengan 1. Selepas 1 jam inkubasi pada 28 ° C, campuran kultur dan phage dibiakkan 1.5 E agar LB, pH 7.2, mengandung dalam kasus ini 100 μg / ml kanamisin. Setelah 3 hari inkubasi tanaman pada suhu 28 ° C, pertumbuhan muncul dalam bentuk koloni terpencil, Bakteria dari beberapa koloni diperiksa untuk tambahan oksotrofi, dalam contoh di atas, menurut guanine menggunakan media sintetik, Frekuensi cotransduksi auxotrophy dengan Tp 5, Tp 7, Tp 9, Tp 10 ialah 70-1002. Diperolehi oleh kaedah yang dicadangkan, diauxotrof U. rehhv ECH agaTp 10 telur: Tp 5 menjalani rawatan yang serupa dengan lysate P 1 sc 1 dengan 1 g 100 gv disebabkan oleh ketegangan dengan auxotrophy triptofan yang diperlukan, yang disebabkan oleh Tp 7 (gr :; Tp 7). Dengan cara ini, ketegangan diperoleh yang bergantung pada tiga asid amino yang diperlukan U. rovGv Echag ;; Tp 10 8 tsAp 5igrtp 7. PRI me R 2, Budaya kaldu malam U, berteriak EH. 1 htp 3 diproses mengikut prosedur yang dijelaskan P 1 st 1 s 1 g 100 gv, yang disebabkan oleh Y, meningkatkan EF veg:; Tp 5, dengan inokulasi campuran pada agar agar dengan kanamisin. Setelah memeriksa klon tahan kanamisin yang tumbuh untuk naxotrofi serine, diauxotroph U. revgia EH1 htp 3 vegtp 5 yang dihasilkan dirawat dengan phage P 1 sc 1 dengan 1 g 100 Gv yang diinduksi dari 7. revgdv cfu cg: Tp 10, dengan campuran yang disemai di agarB dengan tetracycline. 70-1007 klon tahan tetrasiklin yang tumbuh dalam keadaan ini akan mempunyai genotip U. RevSV ECH 1 htp 3 vegtp. 5 cgtp 10, Contoh 3, Jika untuk eksperimen berikutnya pada pemetaan kromosom U. revgdv strain 1171522 10 TehredO. Gortvay Corrector V. Sinitskaya Editor L. Pisman Order 2998/3 Edaran 490 ditandatangani Negara VNIIIPI Jawatankuasa USSR untuk Penemuan dan Penemuan 113035, Moscow, Zh., Raushskaya nab. 4/5. Syarikat pengeluaran dan percetakan, Uzhgorod, ul. Projek, 4, penerima, auxotrophic untuk proline, alanine, tiamin, adenine, kultur kaldu nokturnal, W. revSdv EchrgoTp 9, dirawat dengan P 1 sc 1 dengan 1 g100 dalam pulih dari A. ujian 1 aTP 1., regangan yang dihasilkan dirawat dengan Liatomphage P 1 sc 1 dengan 1 g 100 St. Diperolehi dari W. rev 1 di EL TM;.: TP 5 sysevy pada agar dengan kanamycin, dan strain yang dipilih 7. revalda EChrgoTp 9 a 1 aTP 1 gpt. ;: TP 5 memperkenalkan adenotrofi oleh adenin dengan transduksi penanda ini dari U. revC 1 ke cfac 1 ET 10. Oleh itu, ketegangan dengan penanda yang diberikan U. rov 1 dalam EC rgoTp 9 a 1 aTP 1 M: Tp 5 ac 1 etT 1 Oh, Kaedah yang dicadangkan membolehkan anda menggabungkan dalam strain W. revS 1 yang dikaji ke dalam pelbagai auxotrophy yang jelas dinyatakan, memungkinkan untuk menggunakan media nutrien bermutu tinggi untuk pemilihan, yang sangat memudahkan kerja dengan mikrob wabak, yang berbeza dengan pertumbuhannya yang aneh pada media sintetik. Poli-auxotrophs yang diperoleh stabil dan memperoleh beberapa yang baru yang diperlukan pilihan mengambil masa tidak lebih dari sebulan 1

Permintaan

INSTITUT PENYELIDIKAN DAN PENYELIDIKAN NEGERI ROSTOVSKY-ON-DON

ZARENKOV M. DAN, LEBEDEVA S. A

IPC / Teg

Kod Pautan

Strain yis TsMPM-449 digunakan untuk mengesan mutasi gen langsung

Nombor Paten: 1135188

. dan 10 ciri fisiologi. Ukuran sel kultur 3 hari pada medium lengkap cecair ialah 3.6 f 2.7 mmk. Bentuk sel yang dominan adalah bujur. Pembiakan - oleh pemula. 15 Pada medium lengkap cair, setelah pertumbuhan 3 hari, endapan terbentuk, yang memberikan kekeruhan seragam ketika goncang, filem itu tidak terbentuk. Apabila disalut pada medium lengkap yang diadukan dalam piring Petri, koloni merah bulat terbentuk dengan pinggir rata berdiameter 2.2 cm setelah 18 hari. kepada karbohidrat. Menyerap glukosa, galaktosa, sukrosa, raffinose, maltoeu. Tidak memetabolismekan dextrin, laktosa, xylose, arabinose. Hubungan dengan alkohol. Menyerap etil alkohol dan gliserin. Ia tidak menyerap manitol, dulit, sorbitol.Hubungan dengan asid organik. Asimilasi susu dan.

Strain e. Coli vniigenetics vl 334 n6 dan vniigenetics vl 334 n7-pengeluar l-threonine dan kaedah penyediaannya

Nombor Paten: 875663

. A) b "1. 361 (yy B) dan H 1.334 (yy C). Dalam dua strain terakhir, mutasi yy B dan yy Cis dari strain St T 25 dan Cd T 28, masing-masing, digabungkan dengan mutasi 11 jam oleh transduksi. disemai pada medium minimum yang mengandungi ampisilin. Transformer tahan ampisilin strain CT 14, P 1. 361 dan CH 334 mampu tumbuh pada medium tanpa threonine. Hasilnya menunjukkan bahawa plasmid pU 6 8 mengandungi ketiga-tiga operan genatreonin yang berfungsi: А A, Д B, й B, й. Strain plasmid RU6 digunakan untuk menghasilkan strain pengeluar rheonitis dan digunakan untuk berubah menjadi strain penerima 71. 334, yang membawa mutasi pada gen C dan gL, Ciri strain penerima VNII Genetics I. 334. Strain VNII genetics I.Z. 4 adalah turunan dari strain.

Strain bakteria Seratia marsesens digunakan untuk mengubah dna dengan gen ketahanan ampisilin

Nombor Paten: 1585327

. satu mutan dipilih yang tidak dapat menghasilkan endonuklease ekstraselular tidak spesifik.1 Mutan yang dihasilkan disemaikan dalam termos dengan kaldu daging dan pepton hingga ketumpatan optik 0,05 pada 650 nm, Budaya ditanam pada pengocok dengan ketumpatan optik 0,5, diletupkan dengan sentrifugasi, dicuci dengan 0.1 M sitrat buffer, pH 5 5-20 kali penyerapan optik pada 260 nm diukur pada spektrofotometer SF. Unit aktiviti diambil sebagai jumlah enzim yang memberikan peningkatan kepadatan optik dalam sampel eksperimen berbanding dengan kawalan (campuran reaksi tanpa enzim) per unit optik setiap 1 jam inkubasi dalam dalam bentuk 1 ml cecair kultur (opt, unit ml h 9. Sebagai substrat digunakan ubat.

Strain bakteria jersinia resis digunakan untuk mengawal rantai sintesis l-arginine pada tahap pembentukan l argininosuccinate

Nombor Paten: 1661207

. suntikan subkutan sel mikrob 1 x 10 EP KMag 9 tidak menyebabkan kematian haiwan makmal.Ia dilumpuhkan oleh fasa: diagnostik wabak L, T. D. Errella. 35 Strain Uegs 1 par. 1 s EC MAGC auxotroph. Sebagai tambahan kepada 1: argininosuccinate atau 1: arginine untuk pertumbuhan dan pembiakannya pada suhu 28 ° C dalam medium sintetik. Ia memerlukan 1: methionine dan 1: phenylalanine, 40. Ciri adalah mutasi yang secara artifisial diperkenalkan ke dalam genom, yang merosakkan enzim untuk penukaran citrulline di hadapan ATP dan aspartat menjadi 1: arginin argininosuccinat intetase. Dalam fenotip, sifat ini ditunjukkan oleh 1-arginine auxotrophy dengan kemungkinan menggantikan yang terakhir dengan 1-argininosuccinate. Pada media sintetik dengan 1: methionine, 1: 50 phenylelanin, threonine yang diperlukan.

Kaedah mendapatkan ketegangan bakteria nodul alfalfa

Nombor Paten: 1822883

. Str. rea apb sassasso - "Rapt Zs", 1987, 52, 3, 195-210. Benih tembakau disterilkan dengan larutan 30 hidrogen peroksida dan 96 etil alkohol, diambil dalam nisbah 1; 1, selama 10 minit. Kemudian mereka diletakkan di medium Murashige dan Skoog tanpa hormon (mg / l): NNayoz -1650; Kyoz -1900; CaSg x 2 NgO - 440; M 95 0 x 7 Ng O - 370; K Ng R Oa - 170; NZVOz - 6.2; MnOaa x 4 NgO - 22.3; CoC 1 g x x 6 NgO - 0,025; SOYAO x 5 NgO - 0.025; EpNaa x 7 NgO - 8.6; yagMoOa x 2 NgO - 0.25; K, 1 0.83; ReaOa x 7 NgO - 27.8; Ahli silap mata EDTA x 2 NgO - 37.3; tiamin-N C - 0.1; piridoksin - TAPI - 0,5; asid nikotinik -.

KSOT P mengenai perlindungan buruh - apa itu dan mengapa?

KSOT P mengenai perlindungan buruh - apa itu dan mengapa?

KSOT P mengenai perlindungan buruh adalah sistem yang komprehensif untuk menilai keadaan perlindungan buruh di sebuah kemudahan pengeluaran. Sistem ini adalah kawalan pelbagai peringkat terhadap perlindungan buruh. Sistem ini membantu mengenal pasti faktor risiko pekerjaan dan membantu mewujudkan keadaan kerja yang selamat..

Tetapi, dengan kata mudah, apakah intipati sistem ini, dari mana sistem ini terdiri? Apa tujuan yang dicapai dan bagaimana ia dicapai? Sekarang kita akan memberitahu.

KSOT P mengenai perlindungan buruh dengan kata mudah

Apabila digunakan dengan betul, di tangan yang mampu adalah alat yang kuat untuk memantau perlindungan pekerja. Sehingga setiap pekerja benar-benar terlibat dalam perlindungan buruh dalam jumlah tugas rasmi mereka. Lihatlah kemampuan KSOT P mengenai perlindungan pekerja:

• melibatkan pengurus langsung dan kontraktor dalam pengurusan perlindungan buruh;
• mengembangkan kemahiran tingkah laku pekerja yang mencegah sebarang kecederaan semasa bekerja;
• menilai faktor risiko pekerjaan dan mengembangkan langkah-langkah untuk mencegah kecederaan;
• menyediakan pemantauan keselamatan secara visual;
• untuk menanam budaya pemantauan diri pematuhan terhadap syarat perlindungan buruh dengan sistem penilaian titik.

Mengagumkan, bukan? Jadi bagaimana sistem ini berfungsi? Sebahagiannya, pelaksanaannya menyerupai kontrol 3 langkah terhadap perlindungan buruh: pemeriksaan dilakukan pada selang waktu yang berlainan dan pada tahap manajemen yang berlainan. Ciri khas sistem ini adalah visualisasi..

Prosedur untuk menjalankan KSOT P mengenai perlindungan pekerja

1. Tahap kawalan pertama adalah secara shift

Pada tahap ini, kawalan dilakukan oleh pengurus kerja setiap pergeseran. Semua komen yang dikenal pasti direkodkan dalam penyataan ketidakkonsistenan (dengan cara itu, mana-mana pekerja boleh melakukan ini). Dan pada akhir pergeseran, sel dicat dengan warna yang paling tepat menggambarkan keadaan perlindungan buruh dalam pergeseran ini.

2. Tahap kedua - bulanan

Sebagai peraturan, ketua unit sudah terlibat dalam hal ini. Sudah tentu, seorang wakil pekerja boleh terlibat dalam pekerjaan ini. Dalam senarai semak khas mereka meletakkan tanda "ya" atau - jika item yang diperiksa sepenuhnya sesuai dengan keperluan perlindungan buruh. Tanda "tidak" atau muncul jika sekurang-kurangnya salah satu peraturan dilanggar. Berikut adalah objek kawalan tahap kedua KSOT P mengenai perlindungan buruh:

• ketepatan masa mengisi majalah arahan mengenai perlindungan pekerja;
• keselamatan pekerja dengan alat kerja;
• pagar dan penetapan tempat yang besar dan kawasan berbahaya yang lain;
• kehadiran tanda keselamatan dan tanda isyarat lain;
• pematuhan dengan peraturan kerja dan rehat, disiplin buruh.

Seperti yang anda ketahui, senarai ini jauh dari lengkap, dan boleh dikembangkan sepuluh kali ganda. Perlu diperhatikan bahawa senarai yang sama "dihantar" ke tahap kawalan ketiga.

Tonton video yang berkaitan:

Audit keselamatan pekerjaan: cara melakukan dan mengatur dengan betul?

3. Tahap kawalan ketiga - setiap suku tahun

Kami naik ke tahap yang lebih tinggi. Dan di sini kita sudah dijumpai oleh ketua unit struktur, ketua kesatuan sekerja dan pakar perlindungan buruh. Keputusan yang dijelaskan di bawah dibuat berdasarkan komisen. Pada tahap ketiga, skala penilaian ya-tidak dua dimensi berkembang menjadi sistem titik: 2 mata ditugaskan untuk setiap "ya", titik sifar ditugaskan untuk setiap "tidak".

Lebih jauh lagi. Dari jumlah 100 mata untuk setiap ketidakpatuhan, 2 mata dikeluarkan. Komen dicatat, rencana tindakan dikembangkan untuk menghilangkan pelanggaran. Hasil akhir dicatat dalam protokol dan ditafsirkan sebagai berikut:

Penyakit trofoblastik: gejala dan rawatan

Penyakit trophoblastik adalah sekumpulan tumor ganas dan jinak yang disebabkan oleh neoplasia (anomali proliferatif) trophoblast, unsur tisu ovum. Patologi terbentuk semasa kehamilan atau selepas melahirkan. Ia disertai dengan percambahan vili dan pembelahan sel plasenta previa yang tidak normal. Penyakit trofoblastik didiagnosis pada 1-3% kes, 70% di antaranya disebabkan oleh cystic drift.

Spesies penyakit trofoblastik

Mengikut klasifikasi penyakit antarabangsa (ICD), penyakit trophoblastik merangkumi neoplasma jinak (skidding cystic separa penuh) dan bentuk ganas (tumor sel epitelioid, tumor tempat tidur plasenta, koriokarsinoma).

Memandangkan luasnya lesi, empat tahap penyakit trofoblastik dibezakan:

• Tahap 1 - tumor dilokalisasi di badan rahim;
• Tahap 2 - sel patologi merebak ke faraj dan lampiran;
• Tahap 3 - tumor meluas ke sempadan alat kelamin;
• Tahap 4 - metastasis merebak ke organ lain (otak, hati, ginjal, paru-paru).

Perkembangan penyakit trofoblastik semasa kehamilan sering menyebabkan kematian janin pada janin. Dalam beberapa kes, kehamilan berterusan, tetapi ini menyebabkan kecacatan fizikal embrio yang ketara. Sebagai peraturan, persalinan pramatang berlaku, selepas itu anak itu mati.

Penyebab penyakit trofoblastik

Punca sebenar pembentukan patologi belum diketahui. Pakar mengenal pasti beberapa teori patogenesis penyakit trofoblastik (imunologi, enzimatik, dll.). Menurut salah satu daripadanya, mutasi struktur sel berlaku kerana patologi virus masa lalu. Teori lain didasarkan pada aktiviti enzim yang berlebihan, imuniti yang lemah, dan kekurangan protein..

Faktor-faktor yang mendorong perkembangan patologi termasuk:

• berumur lebih muda dari 20, lebih tua dari 40 tahun;
• kehamilan ektopik, keguguran, sejarah pengguguran;
• penyakit trofoblastik yang dipindahkan semasa kehamilan sebelumnya;
• permulaan awal haid pertama (menarche);
• permulaan hubungan seksual awal (sehingga 16 tahun).

Kemungkinan koriokarsinoma meningkat pada wanita yang telah mengalami drift cystic invasif.

Gejala penyakit trofoblastik

Pembentukan trofoblastik jinak yang berlaku semasa tempoh kehamilan disertai dengan gejala berikut:

• penampilan keputihan berdarah dengan vesikel kecil;
• bengkak, sakit kepala, tekanan darah tinggi;
• kelainan umum, keletihan;
• loya muntah;
• kegagalan hati;
• peningkatan tahap hCG dalam darah;
• kurang pergerakan, aktiviti jantung janin dan tanda-tanda kehamilan yang lain dengan hasil ujian positif.

Kemunculan neoplasma tumor jinak dalam penyakit trofoblastik mungkin disertai dengan kemunculan kista ovari luteal, kehadirannya dimanifestasikan oleh rasa sakit di kawasan lumbal dan perut bawah.

Neoplasma trophoblastik malignan timbul sebagai komplikasi tumor jinak. Mereka juga berkembang selepas pengguguran atau pada waktu selepas bersalin. Tanda-tanda patologi pertama diperhatikan 4-12 bulan selepas kehamilan. Tumor sering terbentuk selepas 10 tahun atau lebih..

Gejala utama neoplasma malignan dalam penyakit trofoblastik adalah keputihan dari pelbagai warna dan intensiti. Terdapat juga penurunan berat badan yang tajam, keletihan, penurunan prestasi. Dengan kemunculan metastasis, rasa sakit berlaku di bahagian bawah perut atau organ lain.

Sekiranya tidak ada terapi yang sesuai, penyakit trofoblastik dapat menyebabkan komplikasi seperti itu:

• pecahnya sista ovari;
• toksikosis teruk dengan muntah berterusan;
• pembentukan proses keradangan pada lampiran, rahim;
• preeklamsia;
• kejutan hemoragik;
• penyebaran metastasis ke organ lain;
• hasil maut.

Pendarahan secara berkala membawa kepada anemia, yang disertai oleh demam, pelanggaran kelenjar susu, menggigil, pelepasan patologi dari puting susu. Dengan kerosakan paru-paru, batuk yang teruk dengan aliran darah berlaku. Sakit kepala, gangguan penglihatan dan pening menunjukkan metastasis tumor ke otak.

Tumor di tapak plasenta jarang didiagnosis sebagai bentuk yang terpisah. Selalunya berjalan lancar. Kemungkinan metastasis adalah sekitar 15%. Proses patologi boleh merebak ke hati, vagina, paru-paru dan otak..

Diagnosis penyakit trofoblastik

Diagnosis penyakit bermula dengan kajian dan analisis sejarah ginekologi (jumlah kehamilan ektopik, keguguran, pengguguran, penyakit, dll.). Penyetempatan kesakitan di perut, dada dan sifat keputihan (sederhana, sengit, bercak) juga ditentukan..

Kemudian pakar obstetrik-ginekologi melakukan pemeriksaan ginekologi, di mana kriteria diagnosis berikut dapat dikesan:

• kehadiran nod yang dilembutkan;
• sianosis membran mukus alat kelamin dalaman;
• pembesaran rahim yang tidak sekata, kesakitan organ semasa pemeriksaan;
• kehadiran fokus metastasis (pembentukan ceri gelap).

Oleh kerana penyakit trofoblastik tidak disertai dengan gejala tertentu dan gangguan ini mungkin merupakan manifestasi dari patologi ginekologi lain, mustahil untuk menentukan diagnosis yang tepat menggunakan kaedah diagnostik yang disenaraikan. Sekiranya disyaki penyakit trofoblastik, ujian klinikal tambahan sedang dilakukan..

Pemeriksaan ultrasound transvaginal, yang memberikan pemeriksaan terperinci mengenai ovari, tiub fallopi dan rahim, dianggap wajib dalam diagnosis patologi. Ultrasound dapat mengesan neoplasma tumor pada peringkat awal perkembangan. Diagnosis disahkan oleh pengesanan sista ovari, yang penampilannya sering menyertai penyakit trofoblastik.

Dari kaedah makmal, pesakit diberi ujian darah untuk tahap hCG. Dengan neoplasma trophoblastik, kepekatan gonadotropin korionik melebihi nilai normal. Pemeriksaan tisu organ yang terjejas juga dilakukan (biosampel untuk analisis diambil semasa pemeriksaan diagnostik).

Sekiranya terdapat kecurigaan metastasis proses tumor, kaedah diagnostik tambahan digunakan yang dapat menentukan penyetempatan metastasis:

• MRI otak;
• Pemeriksaan ultrabunyi organ dalaman;
• x-Ray dada;
• Imbasan CT;
• angiografi pelvis.

Dalam 80% kes, metastasis merebak ke paru-paru dan otak. Lebih jarang, hati dan buah pinggang terjejas. Sekiranya perlu, perundingan pakar bedah saraf, ahli pulmonologi ditunjukkan.

Rawatan penyakit trofoblastik

Terapi neoplasma tumor trofoblastik dikembangkan oleh doktor dengan mengambil kira ciri individu dan usia pesakit, bentuk dan sifat patologi.

Rawatan cystic drift bertujuan menghilangkan neoplasma dengan aspirasi vakum. Dengan pendarahan faraj yang teruk, pembuangan rahim ditunjukkan dengan analisis histologi tisu yang lebih lanjut. Taktik kesan terapeutik selanjutnya ditentukan oleh hasil ujian klinikal. Sekiranya pengesanan mingguan mengenai kepekatan hCG, ultrasound organ pelvis dan x-ray paru-paru tidak menunjukkan tanda-tanda keganasan tumor, kemoterapi tidak dilakukan. Dalam kes ini, pesakit mesti diperhatikan oleh pakar sakit puan dan mengelakkan kehamilan selama setahun.

Protokol untuk rawatan penyakit ganas trofoblastik melibatkan kemoterapi. Prosedur serupa ditetapkan dalam memerangi patologi tanpa campur tangan pembedahan. Perkara ini berlaku terutamanya bagi pesakit yang mengandung anak. Ubat kemoterapi diberikan secara intravena atau intramuskular. Kursus rawatan adalah 4-5 prosedur sehari dengan selang 7-12 hari. Apabila loya dan muntah berlaku, selang waktu antara sesi meningkat.

Pembuangan neoplasma tumor dilakukan dengan petunjuk berikut:

• kehadiran pendarahan yang banyak;
• ukuran tumor sesuai dengan kehamilan 12-14 minggu;
• perforasi rahim;
• sebilangan besar penghantaran yang dipindahkan;
• berumur lebih dari 35 tahun.

Biasanya, hanya rahim yang dikeluarkan semasa pembedahan (ovari dipelihara). Sebagai rawatan tambahan, ubat imunokorektif dikaitkan.

Pengesanan dan rawatan tumor ganas trofoblastik tepat pada peringkat 1-2, sebagai peraturan, membawa kepada pemulihan sepenuhnya. Pada tahap 3 patologi, prognosis kurang baik. Mungkin perkembangan kesan sampingan dalam bentuk hemoptisis, pendarahan rahim, kelumpuhan atau strok.

Ramalan selepas rawatan penyakit trofoblastik

Kemoterapi tepat pada masanya membolehkan penyingkiran penyakit ini sepenuhnya pada 100% wanita tanpa metastasis dan 75% pesakit dengan penyebaran proses patologi ke organ lain. Kambuhan penyakit tumor trofoblastik diperhatikan pada 5-8% kes.

Pada wanita yang menjalani rawatan penyakit trofoblastik yang kompleks, kesuburan dipelihara. Kira-kira 80% pesakit dapat mengandung dan melahirkan anak yang sihat. Tidak ada gangguan khusus pada janin yang ibunya menjalani kemoterapi.

Dianjurkan untuk merancang kehamilan selepas rawatan penyakit trofoblastik tidak lebih awal dari setahun kemudian. Semasa mendiagnosis tumor berisiko tinggi, perlu difikirkan konsepsi 2 tahun selepas kemoterapi. Sepanjang tempoh harus menggunakan kontraseptif hormon, yang akan memberikan perlindungan terhadap kehamilan yang tidak diingini.

Sepanjang tahun, anda perlu diperiksa secara kerap oleh pakar sakit puan dan secara bulanan mengambil ujian darah untuk hCG. Analisis lebih lanjut dilakukan empat bulan sekali..

Pencegahan penyakit trofoblastik

Langkah-langkah khusus untuk mencegah penyakit trofoblastik tidak ada. Pakar mengenal pasti beberapa cadangan dan peraturan, pematuhan yang akan mengurangkan kemungkinan mengembangkan patologi. Ini termasuk:

• penggunaan kontraseptif yang betul, pengecualian pengguguran;
• rawatan patologi tepat pada masanya sistem genitouriner;
• lulus pemeriksaan perubatan yang komprehensif sebelum merancang kehamilan (ini akan mengesan kemungkinan penyimpangan dan melakukan rawatan yang sesuai);
• lawatan berkala ke pakar sakit puan (sekurang-kurangnya 2 kali setahun);
• pendaftaran segera setelah mengesan tanda-tanda kehamilan (terutama bagi wanita yang berisiko).

Lawatan berkala ke doktor, pematuhan dengan cadangan yang disenaraikan dan mengambil ujian akan memastikan pengesanan penyakit dan rawatannya yang tepat pada masanya..

Perhatian! Artikel ini disiarkan untuk tujuan maklumat sahaja dan dalam keadaan apa pun tidak ada bahan ilmiah atau nasihat perubatan dan tidak dapat berfungsi sebagai pengganti perundingan secara langsung dengan doktor profesional. Untuk diagnosis, diagnosis dan rawatan, hubungi doktor yang berkelayakan!

Exosome - mekanisme untuk koordinasi dan saling membantu sel-sel badan

22 Oktober 2013

Exosome - mekanisme untuk koordinasi dan saling membantu sel-sel badan

• 7795
• 6.4
• 7
• lima

Kepada anda dari jauh!

Pengarang

Penyunting

Artikel untuk peraduan "bio / mol / teks": Syarat yang diperlukan untuk kehidupan organisma multiselular adalah hubungan antara sel, yang membolehkan anda menyelaraskan proses biokimia biasa. Untuk melakukan koordinasi tersebut, yang memungkinkan komuniti sel mengawal tingkah laku bahagiannya, diperlukan mekanisme yang memungkinkan pertukaran maklumat yang kompleks pada jarak yang jauh. Enam tahun yang lalu, mekanisme seperti itu ditemui dalam kajian vesikel mikroskopik yang disekresikan oleh sel ke dalam medium ekstraselular. Vesikel ini, sehingga baru-baru ini dianggap sebagai tong sampah untuk membuang sisa dari sel, ternyata menjadi harta yang tidak ternilai untuk perubatan masa depan!

Pertandingan "bio / mol / teks" -2013

Artikel ini diserahkan ke kontes karya sains popular "bio / mol / teks" -2013 dalam pencalonan "Ulasan Terbaik".

Pertandingan ini ditaja oleh Thermo Fisher Scientific yang berwawasan. Penaja Anugerah Penonton - Helicon.

Syarat yang diperlukan untuk kehidupan organisma multiselular adalah hubungan antara sel, yang membolehkan anda menyelaraskan proses biokimia dalam selnya. Komunikasi sedemikian memungkinkan untuk mengawal dan mengarahkan perkembangan dan kerja badan. Sebagai contoh, pengembangan embrio memerlukan peraturan yang rumit: perlu semua sel menghantar isyarat mengenai diri mereka dengan betul dan bertindak balas dengan betul terhadap isyarat yang diterima dari luar. Respons yang tidak mencukupi terhadap isyarat tersebut boleh menyebabkan kelainan perkembangan atau penyakit seperti barah. Isyarat dihantar menggunakan hormon, sitokin dan kemokin, faktor pertumbuhan, neurotransmitter, metabolit, ion, dll. Penghantaran isyarat dapat dilakukan baik melalui rembesan ke ruang ekstraselular, dan melalui persimpangan jurang secara langsung di antara sel [1]. Walau bagaimanapun, kaedah penghantaran isyarat ini melibatkan hubungan rapat antara sel, atau terlalu mudah untuk menukar maklumat yang kompleks pada jarak yang jauh.

Ternyata baru-baru ini, ada cara lain untuk menyebarkan maklumat antara sel - vesikel ekstraselular kecil yang dirembeskan oleh sel ke persekitaran dan dibawa oleh aliran darah ke seluruh badan [2]. Dari saat penemuan hingga awal abad ke-21, tidak ada yang sangat berminat dengan mereka. Kemudian ternyata mereka mempunyai kemampuan untuk mengatur tindak balas imun tubuh. Ketika, pada tahun 2007, asid nukleik ditemui di dalamnya, menjadi jelas bahawa ini masih merupakan mekanisme yang kurang difahami untuk koordinasi dan "tolong menolong" sel-sel badan [3].

Oleh kerana vesikel ini membawa protein, lipid dan asid nukleik, mereka mampu bertindak pada sel sasaran dengan cara yang jauh lebih kompleks daripada bahan terlarut individu. Kemudahan tambahan di sini adalah bahawa kandungan gelembung dikelilingi oleh selaput, yang melindunginya dari kesan persekitaran. Penerima di permukaan membran menyampaikan tepat ke alamat. “Bungkusan” seperti itu mengangkut “pengangkutan air” paling ekonomik - dengan cecair yang beredar melalui saluran darah dan limfa. Ini memastikan pertukaran maklumat antara sel terpencil di pelbagai organ dan bahagian badan..

Sebagai tambahan kepada pemindahan maklumat, vesikel ekstraselular juga dapat berpartisipasi dalam mekanisme "gotong royong" - untuk menyampaikan protein siap yang diperlukan untuk "penerima". Sebagai contoh, vesikel ekstraselular, yang disebut eksosom, mengangkut protein membran synaptotagmin-4 dari neuron ke sel otot. Ia diperlukan untuk membentuk persimpangan neuromuskular (sinaps), di mana isyarat elektrik dihantar dari neuron ke sel otot. Protein ini dihasilkan dalam sel saraf, dan digunakan dalam sel otot, jadi tidak ada cara untuk dilakukan tanpa meneruskan [4].

Pada tahun 2013, kajian mengenai pengangkutan vesikular dianugerahkan Hadiah Nobel: "Hadiah Nobel dalam Fisiologi atau Perubatan (2013): pengangkutan vesikular" [5].

Klasifikasi dan mekanisme pembentukan vesikel ekstraselular

Bergantung pada bagaimana bentuk vesikel ekstraselular dan ukurannya, ia dipanggil badan apoptotik, ektosom atau eksosom.

Badan apoptosis, mereka juga apoptosis, adalah serpihan sel yang dibatasi oleh membran plasma, yang terbentuk sebagai hasil dari apoptosis, yang diatur oleh pemusnahan sel tubuh sendiri. Mereka berdiameter sekitar 50–5000 nm dan mungkin mengandungi organel atau bahkan serpihan inti sel mati.

Ektosom, atau mikrobaikel pemula, terbentuk dengan menonjol membran plasma dari sel ke luar; bonjolan keluar dari membran sel dan berubah menjadi gelembung. Gelembung ini agak besar - biasanya dari 50 hingga 200 nm, tetapi kadang-kadang mencapai diameter 1000 nm.

Exosom adalah vesikel kecil (biasanya dari 40 hingga 100 nm). Pada mulanya, mereka terbentuk di dalam sel - mereka dimasukkan ke dalam rongga yang disebut endosom. Apabila banyak eksosom terkumpul di dalam rongga ini, nasib selanjutnya bergantung pada lipid yang membrannya ditandai. Sekiranya endosom dilabelkan dengan asid lisobisphosphatidyl (phosphatidylinositol-3-fosfat) dan mengandungi protein di mana-mana, maka kandungannya akan hancur: ia akan bergabung dengan lisosom - gelembung membran yang penuh dengan enzim yang memecah protein, karbohidrat, lipid dan asid nukleik. Sekiranya membran endosom mengandungi ceramida, ini adalah isyarat "kirim surat": endosom bergabung dengan membran permukaan sel, dan banyak eksosom ditolak keluar ke medium ekstraselular (Gamb. 1).

Rajah 1. Pembentukan eksosom. Membran eksosom dibentuk dengan mendorong endosom awal ke dalam membran. Protein, RNA, DNA memasuki eksosom dari sitoplasma sel, sedangkan antigen pertama kali memasuki endosom akibat endositosis dan sudah terikat pada protein kompleks histokompatibilitas utama di permukaan luar eksosom. Reseptor eksosom, jelas, diwarisi dari membran plasma sel. Nasib endosom bergantung pada pelabelan membrannya dengan lipid tertentu: jika dilabelkan dengan asid lisobisphosphatidyl (titik merah), maka kandungannya akan musnah, dan jika ia adalah ceramida, ia akan ditolak keluar dari sel. GTPases keluarga Rab, yang mana pelbagai anggota melakukan fungsi yang berbeza, mengarahkan proses ini: Rab5 mengarahkan pembentukan endosom, Rab7 mengatur penurunan kandungan endosom multivesikular dalam lisosom, dan Rab11, Rab27 dan Rab35 diperlukan untuk rembesan eksosom ke ruang ekstraselular. Telah ditunjukkan bahawa eksosom mengandungi sekitar 4000 protein yang berbeza, lebih dari 1500 miRNA dan mRNA yang berbeza, serta DNA. Bahagian bawah kanan - eksosom "diperbesar".

Mekanisme penyerapan eksosom oleh sel mamalia masih kurang difahami. Mekanisme ini merangkumi endositosis aktif eksosom oleh fosforilasi kinase-1/2 terkawal ekstraselular (ERK1 / 2), yang menghantar isyarat ini ke protein kejutan haba 27 (HSP27). Proses endositosis diatur secara negatif oleh protein guaolin-1 [6].

Pengambilan eksosom juga bergantung pada proteoglikan yang berfungsi sebagai reseptor eksosom, khususnya 2-O-sulfasi dan N-sulfasi heparan sulfat pada permukaan sel penerima. Telah ditunjukkan bahawa kedua-duanya dengan kekurangan proteoglikan yang disebabkan oleh mutasi dan dengan rawatan heparin sel, rangsangan migrasi sel kanker dan pertumbuhan tumor yang dimediasi oleh eksosom dikurangkan dengan ketara. Penemuan ini memberi peluang untuk mengembangkan rawatan baru..

Eksosom dan ektosom telah dijumpai dalam pelbagai cairan tubuh: mereka dapat dijumpai dalam air kencing, air mani, serum darah, limfa, air liur, air mata, rembesan hidung, hempedu, cairan ketuban, dan bahkan susu ibu. Hampir mana-mana sel kita, dari saluran gastrointestinal dan kelenjar endokrin hingga kulit dan otak, mampu menghasilkan eksosom..

Seperti yang berikut dari tabel, RNA dengan fungsi pengawalseliaan terutama terkandung dalam eksosom, yang membuktikan keutamaan mereka dalam kegiatan koordinasi komuniti selular tubuh.

Keupayaan untuk mengeluarkan eksosom dimiliki oleh semua organisma multisel dan bahkan beberapa uniselular yang disusun dalam komuniti. Jelasnya, mekanisme komunikasi ini untuk tujuan pengaturan bersama sangat penting sehingga tidak mengalami perubahan yang signifikan dalam proses evolusi [8].

Oleh itu, selanjutnya kita akan memfokuskan pada penerangan mengenai vesikel tertentu.

Komposisi eksosom

Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, banyak maklumat telah dikumpulkan mengenai komponen vesikel ekstraselular dari pelbagai jenis sel dan cecair. Ternyata komposisi protein, lipid, miRNA, dan RNA messenger mereka sangat bergantung pada asal-usul vesikel, dan juga pada keadaan fisiologi sel yang menghasilkannya (sihat atau sakit) [9]. Sebagai peraturan, semua eksosom mengandungi aneksin, yang mengatur proses peleburan membrannya dengan membran sel; GTPase Rab; molekul dan reseptor lekatan yang membantu "dok" eksosom ke sel sasaran; serta protein ESCRT (kompleks penguraian endosom yang direka untuk pengangkutan protein dan RNA intraselular - seperti analog perkhidmatan penyortiran label pelabuhan). Penanda utama eksosom adalah protein transmembran CD63, CD81, dan (kadang-kadang) CD9 dari keluarga tetraspanin. Sebagai tambahan, eksosom, seperti sel, membawa protein kompleks histocompatibility utama (MHC) pada membrannya, yang bertanggungjawab untuk mengenali sel dan tisu "mereka sendiri" dan "asing"; serta protein kejutan haba, mereka juga merupakan protein tekanan (HSP60, HSP70, HSP90). Kedua-duanya mengambil bahagian dalam pengikatan antigen dan penyampaian antigen ini ke sistem imun..

Gambar 2. Komposisi dan fungsi komponen ciri eksosom (pada hakikatnya, eksosom mengandungi kira-kira 4000 protein yang berbeza, lebih dari 1500 miRNA dan mRNA yang berbeza, serta serpihan DNA). Bingkai merah menonjolkan molekul yang digunakan untuk pengasingan dan pengenalan afiniti; bingkai hijau - protein histokompatibiliti: MHC I dan II - antigen kelas I dan II kompleks histokompatibiliti utama; HLA-G - antigen leukosit manusia G (bertanggungjawab untuk imunotoleransi plasenta); bingkai ungu - protein yang bertanggungjawab untuk pengecaman dan lekatan pada sel penerima; bingkai kelabu menunjukkan kandungan dalaman yang dibawa oleh eksosom: enzim dan protein otot, protein kejutan haba, RNA messenger, RNA mikro, dll..

Eksosom sebagai Imunomodulator

Kemampuan vesikel membran untuk mengangkut maklumat pertama kali ditunjukkan dalam kajian eksosom dari B-limfosit. Ternyata mereka membawa protein kompleks histocompatibility utama - MHC kelas II, yang berkaitan dengan antigenik peptida (pembinaan diperlukan untuk tindak balas imun). Dan mereka membawanya bukan di suatu tempat, tetapi di sel T khusus. Begitu juga, eksosom memindahkan kompleks MHC kelas I dengan antigen peptida dari sel dendrit ke limfosit T yang "naif". Setelah menerima "huruf" seperti itu, T-limfosit berhenti menjadi naif dan bersedia untuk mengenal pasti antigen. Begitu juga, eksosom menyebarkan antigen dan kompleksnya dengan MHC antara sel dendritik.

Sel dendritik juga dapat menghasilkan eksosom yang mengandungi molekul penekan imun. Ini menyumbang kepada pengembangan toleransi imun dan mengatasi proses keradangan [10].

Jenis eksosom lain dirembeskan oleh sel plasenta ke dalam darah ibu. Mereka membawa faktor FasL, yang menghalang sel T dan sel NK (dari bahasa Inggeris. Pembunuh semula jadi), yang menghalang serangan imun ibu terhadap janin. Eksosom serupa juga terdapat di kolostrum dan susu ibu yang menyusu..

By the way, sel NK sendiri juga mengeluarkan eksosom, secara kiasan disebut "nanopools melawan tumor." Mereka mengandungi dua "molekul pembunuh": perforin, yang berlubang di membran plasma sel sasaran, dan ligan FasL yang sama, yang berinteraksi dengan protein transmembran FasR, reseptor pemicu apoptosis.

Malangnya, tumor merebak ke seluruh badan dan melarikan diri dari nasdor imun dengan eksosom juga. Terdapat bukti yang semakin meningkat bahawa eksosom dari tumor menghalang tindak balas imun dan mempromosikan angiogenesis (pembentukan saluran darah baru), sehingga menyumbang kepada pertumbuhan tumor. Di samping itu, eksosom tumor dapat memprovokasi pembentukan metastasis, mengaktifkan migrasi sel-sel tumor dan mempersiapkannya di tempat baru untuk apa yang disebut metastatik niche - persekitaran mikro yang mempromosikan rooting dan pertumbuhan.

Oleh itu, miR21 dan miR29a eksosom miR yang dirembeskan oleh sel barah dapat mengikat reseptor seperti tol [11] pada sel-sel sistem imun yang mengelilinginya, yang membawa kepada pengaktifan jalur NFκB (dari faktor nuklear kappa-rantai cahaya-penambah diaktifkan Sel B) dan peningkatan rembesan interleukin 6 (IL-6), serta faktor nekrosis tumor TNF, yang akhirnya menyumbang kepada keradangan, percambahan sel barah dan meningkatkan potensi pembentukan metastasis [12].

Aethlon telah mengembangkan kolum pemurnian Hemopurifier, yang, menurut kajian praklinik in vitro, dapat membersihkan darah pesakit dari eksosom barah payudara, barah ovari, melanoma metastatik, barah kolorektal dan limfoma. Diasumsikan bahawa penyingkiran eksosom yang dirembeskan oleh sel barah akan membantu meningkatkan hasil rawatan ubat [13], [14], kerana dianggap sebagai penyebab ketahanan tumor terhadap terapi [15], [16].

Pemindahan bahan genetik

Pada tahun 2007, didapati bahawa eksosom yang dihasilkan oleh sel mast mengandungi bukan sahaja protein, tetapi juga RNA [17]. Kedua-duanya adalah RNA matriks yang mengandungi maklumat mengenai urutan asid amino protein, dan RNA kecil aktif yang berfungsi - molekul bukan pengekod dengan panjang sekitar 22 nukleotida yang mengambil bahagian dalam pengaturan ekspresi gen [18].

Molekul RNA tidak memasuki eksosom secara rawak. Ini dibuktikan dengan fakta bahawa RNA ribosom yang paling biasa di dalam sel hampir tidak masuk ke dalam eksosom. Di samping itu, kumpulan miRNA dan mRNA dalam eksosom tidak sepenuhnya menggambarkan kandungan RNA ini dalam sel induk. Sebagai contoh, lebih daripada 8.000 mRNA yang berbeza dijumpai dalam sel adenokarsinoma tikus, dan tidak lebih dari 1.500 di eksosom dari sel-sel ini. RNA yang bergerak dengan eksosom dari satu sel ke sel yang lain disebut shuttle, atau shuttle RNA (dari RNA shuttle eksosom) - esRNA).

Sehingga baru-baru ini, mekanisme utama aktiviti maklumat eksosom dianggap sebagai pemindahan RNA messenger, yang menyandikan protein yang diperlukan untuk sel penerima. Walau bagaimanapun, kajian beberapa tahun kebelakangan menunjukkan bahawa sel berkomunikasi antara satu sama lain menggunakan urutan yang tidak diterjemahkan dari kedua-dua miRNA [22] dan matriks (!) RNA sebagai "bahasa". Pembawa mesej ini adalah eksosom.

Menurut Batagov dan Kurochkin, eksosom yang dirembeskan oleh sel manusia terutama mengangkut serpihan mRNA yang diperkaya di wilayah 3 regions yang tidak diterjemahkan [23]. Berdasarkan ini, penulis membuat anggapan berani bahawa serpihan mRNA eksosom dapat bertindak sebagai RNA yang bersaing, yang tujuannya adalah untuk mengatur aktiviti kestabilan, penyetempatan dan terjemahan mRNA dalam sel penerima, kerana wilayah yang tidak diterjemahkan 3′ kaya dengan elemen yang menentukan lokasi mRNA [ 24] dan kaya dengan laman web pengikatan microRNA. Dengan anggapan ini, mereka mengembangkan hipotesis bahawa transkrip RNA dapat "bercakap" antara satu sama lain menggunakan bahasa yang dimediasi miRNA (dengan persaingan mengikat untuk kumpulan miRNA yang terhad) mengikut skema: RNA → miRNA → RNA [25].

Mekanisme utama pembentukan mRNA, yang diperkaya di wilayah 3′ yang tidak diterjemahkan, adalah pemisahan mRNA pasca transkripsional (atau mungkin pasca terjemahan), dan bukannya permulaan transkripsi baru [26]. Oleh itu, kumpulan RNA semacam itu dapat dianggap sebagai "laporan" mengenai aktivitas sel penderma eksosom dan sebagai kumpulan RNA yang mengatur keselamatan dan kemampuan untuk menerjemahkan kumpulan mRNA sel penerima. Dalam kes ini, eksosom yang diperkaya dengan wilayah mRNA 3′ yang tidak diterjemahkan dapat memainkan peranan sebagai "span" yang menyekat mikroRNA untuk penyahmampatan mRNA sel penerima.

Sangat menarik untuk diperhatikan bahawa mRNA yang diperlukan untuk sintesis kebanyakan sintetase tRNA, serta variannya yang dihasilkan dari penyambungan, terdapat dalam eksosom [27]. Telah ditunjukkan bahawa komposisi kumpulan mRNA ini dapat diatur - ia berubah sebagai tindak balas terhadap rangsangan luaran. Selain fakta bahawa sintetase tRNA adalah enzim yang melakukan tugas utama penyahkodan kod genetik semasa sintesis protein, mereka mengatur banyak fungsi yang tidak berkaitan dengan sintesis protein, termasuk pengendalian kitaran sel dan pembezaan tisu, serta keradangan dan kemotaksis sel [28] ].

Juga penting untuk diperhatikan bahawa, menurut beberapa laporan, eksosom mengandungi mikroRNA yang tidak matang, tetapi pendahulunya [29], yang bermaksud bahawa potensi dan masa pendedahan mereka ke sel penerima bergantung pada sel penerima itu sendiri.

Penularan mikroRNA adalah salah satu jalan utama untuk interaksi antara sel stem dan persekitaran mikro mereka. Sebagai contoh, eksosom yang dirembeskan oleh sel endothelial merangsang migrasi dan angiogenesis sel penerima dengan memindahkan miR-214 miRNA [30]. Sel barah juga menggunakan cara ini. Seperti yang dinyatakan di atas, pemindahan eksosom miR21 dan miR29a dari sel barah mempengaruhi ekspresi gen dalam sel sasaran, menyumbang kepada penyebaran metastasis.

Persoalannya secara semula jadi timbul: adakah mungkin untuk menyekat pemindahan mikroRNA dari sel yang berpenyakit? Petunjuk mungkin adalah kenyataan bahawa untuk pembentukan eksosom, ceramida diperlukan - lipid, yang merupakan bahagian membran dan memainkan peranan molekul isyarat; kita telah menyebutnya pada awal ketika kita bercakap mengenai rembesan eksosom. Adalah mungkin untuk menekan rembesan eksosom dan dengan demikian menyekat pemindahan mikroRNA dari sel-sel yang berpenyakit secara eksperimen in vitro dengan menghalang aktiviti sphingomyelinase, enzim yang menghasilkan ceramida, dengan memecah sphingolipid membran.

Pelbagai peranan yang dimainkan oleh lipid dalam pembentukan membran dan dalam proses pemberian isyarat dapat ditemukan dalam artikel “The Lipid Foundation of Life” [31]. - Merah.

Sebagai tambahan kepada RNA, eksosom juga mungkin mengandungi DNA bergerak, misalnya mitokondria. Dalam cairan ekstraselular, termasuk plasma, ada enzim yang menghancurkan DNA dan RNA, jadi pembawa maklumat genetik mesti bergerak dari satu sel ke sel lain di dalam gelembung mikro membran yang melindungi mereka dari enzim ini. Berbanding dengan sel RNA, RNA eksosom lebih stabil dan tahan terhadap degradasi semasa penyimpanan berpanjangan dan kitaran pembekuan dan pencairan berulang. Kualiti berguna untuk produk diagnostik dan terapi yang berpotensi!

Penjanaan semula

Eksosom nampaknya memainkan peranan penting dalam memperbaiki organ yang rosak. Semakin banyak bukti menunjukkan bahawa vesikel ekstraselular yang dirembeskan dari sel stem hematopoietik, sel strom multipoten, atau sel stem jantung mempunyai sifat unik. Mereka melindungi sel yang tersisa dalam tisu yang rosak dari apoptosis, merangsang pembahagian sel yang masih hidup dan pertumbuhan vaskular.

Bagaimana ini berlaku? Pertama, membran vesikel ini diperkaya dengan lipid aktif secara biologi, seperti saudara dekat ceramides sphingosine-1-fosfat. Kedua, faktor pertumbuhan antiapoptosis dan perangsang dan sitokin disintesis di permukaannya. Ketiga, mereka dengan sengaja memberikan mRNA, mikroRNA pengatur dan enzim ke tisu yang rosak, dan semua "bantuan kemanusiaan" ini meningkatkan kemampuan sel untuk tumbuh semula.

Sebagai contoh, sel stem mesenchymal menghantar, melalui eksosom, ke sel-sel tubulus ginjal yang rosak, matriks RNA reseptor faktor pertumbuhan-1 seperti insulin. Dalam sel, sintesis reseptor ini bermula, dan penjanaan semula lebih aktif. Begitu juga, pengangkutan TGF-β1 mRNA oleh eksosom semasa kerosakan menimbulkan pengaktifan proses regenerasi dan pembaikan tisu [32].

Mekanisme serupa untuk memprogram ulang sel yang rosak dengan sel induk juga dapat digunakan untuk infark miokard. Dalam eksperimen haiwan, walaupun satu suntikan eksosom sel induk mesenchymal mengurangkan ukuran serangan jantung dan memperbaiki keadaan eksperimen. Jelas sekali, eksosom menebus kekurangan enzim yang penting untuk membekalkan sel dengan tenaga, dan, oleh itu, untuk pemulihan otot jantung yang cepat [33], [34].

Perkembangan dan Penuaan Organisma

Baru-baru ini diketahui bahawa jangka hayat neuron otak bergantung pada persekitaran di mana mereka berada. Sekiranya transplantasi neuron tikus ke otak tikus yang hidup lebih lama daripada tikus, jangka hayat sel-sel saraf ini dapat lebih dari dua kali ganda masa hidup rata-rata yang diukur oleh alam semula jadi ke tikus. Kajian menggunakan kaedah parabiosis heterokron, di mana sistem peredaran dua haiwan yang berlainan usia digabungkan secara pembedahan, menunjukkan bahawa dengan operasi ini, haiwan tua itu lebih muda dan yang muda, sebaliknya, semakin tua. Jelas, penurunan aktiviti sel yang berkaitan dengan usia mungkin disebabkan oleh pendedahan kepada faktor-faktor yang beredar dalam darah, komposisi yang berbeza-beza dengan usia. Pembersihan darah menggunakan pemisah menunjukkan bahawa prinsip aktif tertumpu di zon zarah bertepatan dengan ukuran dengan eksosom.

Dalam tinjauan yang baru diterbitkan, Den Xu dari China dan Hidetoshi Tahara dari Jepun [35] membuktikan hipotesis bahawa eksosom, dan lebih tepatnya, mikroRNA yang dibawa oleh mereka, memainkan peranan penting dalam mengkoordinasikan proses penuaan sel. Sebilangan dari mereka dapat menyumbang kepada penuaan dengan mencetuskan jalur isyarat yang menyebabkan penurunan badan, sementara yang lain melindungi daripada proses ini. Eksosom dari sel yang berumur dengan mikroRNA mereka mengubah persekitaran mikro mereka sedemikian rupa sehingga ia mulai menyukai penyakit yang berkaitan dengan usia, penurunan imuniti, keradangan dan gangguan fungsi pelbagai organ.

Sehubungan dengan yang disebutkan di atas, sangat menarik untuk diperhatikan bahawa, sebagai peraturan, aktiviti biologi dan terapeutik, serta kemampuan untuk mengeluarkan eksosom sel stem mesenchymal, berkorelasi terbalik dengan tahap perkembangan penderma [36].

Diagnostik

Kajian eksosom sangat praktikal. Contohnya, mereka boleh mengatakan banyak tentang keadaan badan. Dari eksosom yang terkandung dalam plasma darah, air kencing dan bio-cairan lain, miRNA dapat diperoleh untuk diagnosis. Seperti yang telah disebutkan, membran lipid melindungi RNA dari enzim agresif, oleh itu, kemungkinan penurunannya semasa pengangkutan dan penyimpanan sampel adalah kecil. Hasil analisis seperti itu akan membantu tidak hanya untuk mendiagnosis, tetapi juga menentukan tahap penyakit, mengetahui apakah ia sedang berkembang atau sudah memasuki tahap pengampunan, untuk memeriksa keberkesanan rawatan.

Eksosom mengandungi protein, mikroRNA, dan RNA utusan sel dari mana asalnya. Ini membolehkan anda menggunakannya untuk fenotip dan pengenalan sel. Mereka dapat memberitahu banyak tentang keadaan sel:

• peningkatan miRNA-155 menunjukkan adanya makrofag pro-radang dan lesi aterosklerotik;
• mikroRNA keluarga Let-7 dalam eksosom mungkin menunjukkan percambahan aktif sel, dan oleh itu, tumor yang semakin meningkat;
• penampilan dalam plasma darah miRNA-208a otot jantung yang khas dan perubahan tahap beberapa miRNA lain dapat digunakan untuk diagnosis awal kerosakan miokardium;
• eksosom dari neuron yang dijangkiti prion [37], yang merupakan protein berjangkit yang menyebabkan penyakit teruk sistem saraf pusat, seperti ayam atau "lembu gila", juga mempunyai komposisi ciri miRNA.

Terdapat lebih banyak contoh yang menunjukkan keupayaan diagnostik untuk eksosom. Satu lagi diagnostik eksosom adalah bahawa daripada biopsi tisu pembedahan yang sangat menyakitkan dan kadang-kadang tidak selamat, anda boleh memeriksa cecair badan dan mendapatkan maklumat yang sama. Perkara ini sangat penting ketika mendiagnosis barah otak, seperti glioma, apabila banyak biopsi boleh mengancam nyawa..

Sekumpulan penyelidik Amerika mengembangkan instrumen analitik yang sangat sensitif untuk kajian pantas mikroseikel secara langsung dalam sampel darah pesakit [38]. Darah disalurkan melalui cip mikrofluidik di mana mikroksikel dilabel dengan antibodi monoklonal yang terikat pada nanopartikel magnetik dan kemudian dikesan menggunakan sistem pengesanan resonans magnetik nuklear miniatur. Kajian mengenai RNA eksosom yang diasingkan dari darah dan cecair serebrospinal akan membolehkan para saintis menguji kehadiran tumor dan memerhatikan perubahannya tanpa biopsi. Dengan menggunakan alat Diagnostik Exosome EXO50, hanya dari 0,1-0,5 ml serum darah atau cecair biologi lain, anda dapat memperoleh protein RNA atau eksosom yang mencukupi untuk membuat diagnosis yang jelas [39]. Analisis dapat dilakukan pada sampel cair segar dan beku, tanpa memerlukan kaedah penyimpanan khas.

Exosome Diagnostics (USA) mengembangkan kit pengesanan kanser prostat dengan ketepatan 75%. Pada masa yang sama, Exosome Sciences, Inc dan Aethlon Medical, Inc. menghasilkan ujian ELLSA ™ (Enzyme Linked Lectin Specific Assay) untuk mengenal pasti eksosom spesifik virus imunodefisiensi manusia (HIV), tuberkulosis (TB) dan pelbagai bentuk barah, termasuk barah kolorektal, ovari, payudara, melanoma dan limfoma. Syarikat Estonia HansaBioMed tidak jauh di belakang mereka, dalam katalog di mana anda boleh menemui pelbagai produk untuk memeriksa eksosom: plat imun 96 sel, imunogranul, botol dengan piawai eksosom lyophilized, antibodi, kit untuk pengekstrakan RNA dan mengkaji proteome eksosom.

Dari terapi sel hingga terapi eksosom

Kajian terbaru menunjukkan bahawa eksosom dapat digunakan bukan hanya untuk diagnosis, tetapi juga untuk rawatan. Jauh dari senarai kemungkinan aplikasi terapeutik sudah termasuk imunoterapi, pembuatan vaksin, pengatur angiogenesis, penyampaian pelbagai ubat ke tisu sasaran (termasuk enzim yang mudah rosak dan ubat-ubatan berdasarkan RNA: mikroRNA, RNA utusan, RNA gangguan kecil [ 40]).

Memang, eksosom dalam banyak aspek adalah kaedah penyampaian ubat yang ideal [41], [42]. Mereka dapat membawa sebilangan besar ubat, dan berkat membran lipid mereka melindungi kandungannya dari pencairan dan pemusnahan (yang sangat penting jika ubat itu adalah enzim atau asid nukleik), dan juga dapat memindahkan kandungannya melalui membran plasma sel. Selain itu, vesikel membran ini tidak beracun, kerana sifat itu sendiri dirancang untuk metabolisme antar sel, dan dapat diterima dengan baik oleh tubuh, seperti yang dibuktikan oleh kehadirannya dalam cecair biologi. Terima kasih kepada reseptor di permukaannya, mereka secara selektif menjumpai sel sasaran, sehingga meningkatkan kecekapan pemindahan ubat, protein, dan RNA dan mengurangkan kemungkinan kesan sampingan [43]. Sebagai contoh, jika sediaan eksosom yang mengandung obat anti-inflamasi hanya dimasukkan ke dalam hidung, ubat itu akan dihantar ke sel-sel otak tertentu, iaitu, ia dapat melintasi penghalang darah-otak. Penting untuk diperhatikan bahawa, jika perlu, anda boleh mengubah komposisi reseptor di permukaan eksosom dan menghantarnya "ke alamat baru".

Contoh Terapi Exosom

Exosom dapat digunakan untuk terapi imun dan ubat-ubatan, serta untuk terapi menggunakan gangguan RNA (Gambar 3-5). Tetapi itu bukan semua: langkah seterusnya adalah penggunaannya bukan terapi sel!

Rajah 3. Imunoterapi. Eksosom yang mengandungi antigen tumor di dalam dan / atau di permukaan membran diasingkan dari pelbagai sumber - cecair rongga pesakit, kultur sel tumor, atau kultur sel imun, dan kemudian diberikan kepada pesakit untuk mendapatkan tindak balas imun yang disasarkan..

Rajah 4. Terapi dengan gangguan RNA. Kaedah bioengineering mencipta budaya sel dendrit yang mensintesis konstruk chimeric - protein membran Lamp2b dijadikan pembawa peptida yang mengenali neuron. RNA gangguan pendek - siRNA (kelas RNA untai dua yang berbeza dari miRNA tetapi mempunyai peranan yang serupa dalam peraturan) dimuat ke dalam eksosom yang diperoleh dari sel dendrit seperti itu menggunakan elektropori. Suntikan eksosom intravena yang bertujuan untuk mencari neuron dan mengandungi siRNA mengurangkan aktiviti gen sasaran dalam sel saraf.

Rajah 5. Terapi ubat. Molekul ubat diletakkan di dalam eksosom atau pada membrannya - ini memudahkan penyampaian yang disasarkan dan meminimumkan penurunan.

Sel stem mesenkim manusia mempunyai keupayaan untuk mendorong imunosupresi dan mengaktifkan proses regenerasi. Oleh itu, mereka disiasat secara intensif untuk penggunaannya dalam rawatan jantung, ginjal, tisu saraf, sendi dan pertumbuhan semula tulang, serta rawatan penyakit radang dan penindasan reaksi penolakan semasa pemindahan. Kajian haiwan klinikal menunjukkan bahawa keberkesanan terapi sel stem mesenchymal dimediasi bukan oleh pembezaan dan penggabungannya ke dalam tisu sasaran, tetapi oleh faktor trofik kesan terapeutik yang dirembeskan oleh mereka, salah satunya adalah eksosom. Berdasarkan fakta bahawa kesan terapeutik sel stem mesenchymal mungkin berdasarkan pada kesan terapi eksosom yang dihasilkan oleh mereka [25], yang, tidak seperti sel, mudah bertolak ansur dengan pembekuan dan pencairan, diusulkan untuk beralih dari terapi sel ke terapi eksosom. Untuk pengeluaran eksosom secara besar-besaran, disarankan untuk menggunakan kultur sel stem mesenkim manusia yang mampu berkembang biak. Sudah berjaya membuat barisan sel "perindustrian" sel seperti itu, yang dari masa ke masa tidak kehilangan keupayaan untuk membelah, mengekalkan sepenuhnya keupayaan untuk mengeluarkan eksosom [44]. Penting untuk diperhatikan bahawa, tidak seperti sel, eksosom tidak dapat membiak sendiri dan oleh itu tidak dapat keluar dari kawalan dan mula membentuk tumor, yang bermaksud bahawa terapi eksosom lebih selamat daripada terapi sel. Eksosom dari kultur sel NK juga merupakan agen terapi yang menjanjikan - seperti yang anda sangka, senjata berpotensi melawan tumor.

Sudah tentu, ada masalah yang tidak dapat diselesaikan. Oleh kerana eksosom membawa protein dari kompleks histokompatibiliti utama, eksosom allogeneik (yang diambil dari orang lain) secara teoritis dapat menimbulkan tindak balas imun pada pesakit, walaupun terdapat aktiviti imunosupresif (walaupun menurut beberapa laporan bahkan pemindahan eksosom interspesifik dari sel stem mesenchymal, misalnya, dari tikus tikus, tidak disertai dengan tindak balas imun). Kunci penyelesaiannya ialah pemilihan sel penderma yang teliti untuk penghasilan eksosom, serta mendapatkan kultur sel stem mesenkim autologous (sendiri) dari sel induk yang diinduksi.

Di samping itu, perlu mencapai beberapa standardisasi pendekatan metodologi (terutamanya kaedah untuk mengasingkan mikro bergerak) untuk membandingkan hasil yang diperoleh oleh makmal penyelidikan yang berbeza [45].

Sebagai kesimpulan, perlu diperhatikan bahawa kajian mengenai eksosom dan mikroseikel yang dirembeskan lain adalah bidang baru yang berkembang pesat dari penyelidikan asas dan klinikal, yang bertujuan untuk mendapatkan gambaran yang lebih lengkap mengenai peranan eksosom dan fungsinya dalam keadaan fisiologi dan patologi. Bukti di atas bahawa bidang penyelidikan ini menjanjikan peluang yang belum pernah terjadi sebelumnya untuk menemui mekanisme interaksi antara sel dan pengembangan kaedah diagnosis dan rawatan baru.

Dalam bentuk asalnya, artikel itu diterbitkan dalam Kimia dan Kehidupan [46].